Anti DYKDDDDK（FLAG） Antibody-HRP抗體

產(chǎn)品介紹
DYKDDDDK肽段是融合蛋白表達(dá)純化過(guò)程中最常用的標(biāo)簽(tag)之一，DYKDDDDK 肽段也經(jīng)常被稱為 Flag肽段，是 Sigma公司的注冊(cè)商標(biāo)。它可以連接在融合蛋白的 N 端、C端或序列中間，具有極好的親水性，更容易展示在融合蛋白的表面，干擾融合蛋白功能的可能性較小。這一標(biāo)簽還具有一個(gè)優(yōu)勢(shì)：連接在目的蛋白N端時(shí)，可以被 Enterokinase(EKprotease)從序列C端賴氨酸的位置切除，而不留下冗余殘基。抗 DYKDDDDK 標(biāo)簽的抗體能對(duì) DYKDDDDK 標(biāo)簽融合蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確的檢測(cè)和純化，通過(guò)一定的工藝將辣根過(guò)氧化物酶 (HRP)偶聯(lián)至DYKDDDDK標(biāo)簽抗體上，進(jìn)行 WB 實(shí)驗(yàn)時(shí)加入發(fā)光液 A和 B，一般是魯米諾和過(guò)氧化氫，在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的催化作用下，魯米諾與過(guò)氧化氫反應(yīng)生成一種過(guò)氧化物，過(guò)氧化物不穩(wěn)定隨即分解，形成一種能發(fā)光的電子激發(fā)中間體，當(dāng)后者由激發(fā)態(tài)返回至基態(tài)，就會(huì)產(chǎn)生熒光，實(shí)現(xiàn)對(duì) DYKDDDDDK 標(biāo)簽融合蛋白快速檢測(cè)。
基本信息如下：
抗體來(lái)源:重組抗體
交叉反應(yīng):DYKDDDDK標(biāo)簽融合蛋白
克隆類型:單克隆抗體
偶聯(lián)物:辣根過(guò)氧化物酶 (HRP)
純化方式:rProtein A 親和純化
儲(chǔ)存緩沖液:1xPBS(pH7.4),0.05% proclin300,50% 甘油

產(chǎn)品應(yīng)用
WB=1:30000-1:100000
ELISA=1:5000-1:10000

儲(chǔ)存條件

干冰運(yùn)輸，-20°C可保存2年,避免反復(fù)凍融

注意事項(xiàng)
1) 本產(chǎn)品為 HRP 直標(biāo)抗體,需要避光保存于 -20°C或者 -80°C中;
2) 本產(chǎn)品靈敏度高,WB 稀釋比值請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,否則可能會(huì)出現(xiàn)非特異性條帶;
3) NC 膜或者 PVDF 膜在轉(zhuǎn)膜前需要用甲醇激活,轉(zhuǎn)膜后抗體稀釋液盡量過(guò)量,轉(zhuǎn)膜和抗體孵育過(guò)程中不要產(chǎn)生氣泡:
4) 本品在 37°℃下孵育 30min-60min 即可產(chǎn)生很明顯的信號(hào),常溫孵育可適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間。

參考信息 

1) 表達(dá)系統(tǒng)：293細(xì)胞分泌表達(dá); 

2) 蛋白信息：帶有DYKDDDDDK標(biāo)簽的重組蛋白，大小≈25KDa； 

3) 上樣順序：1為10ng純化后的目的蛋白，2為50ng純化后的目的蛋白，3為牛血清白蛋白(BSA)； 

4) 抗體稀釋液體積：10ml； 

5) 抗體孵育條件：37℃搖晃孵育30min; 

6) 顯色：ECL進(jìn)行顯色; 

7) 結(jié)論：Anti DYKDDDDK Antibody-HRP 按照 1:10000，1:30000和1:100000稀釋后（抗體稀釋體積10ml）37℃搖晃孵育30min，能 夠看到很明顯的信號(hào)，目的條帶位置在25KDa，在50-55KDa處有較弱的聚體條帶，隨著稀釋比值的增大，信號(hào)值會(huì)有下降，我們推薦客戶使 用1:30000 的梯度進(jìn)行抗體稀釋。