大腸桿菌自誘導(dǎo)培養(yǎng)基

產(chǎn)品介紹 

大腸桿菌自誘導(dǎo)培養(yǎng)基（E.coliAuto-Indection Medium）是在LB培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)優(yōu)化配方，可用于lac調(diào)控表達(dá)的大腸桿 菌菌株培養(yǎng)及蛋白表達(dá)。含有多種營養(yǎng)物質(zhì)并額外添加微量元素、氨基酸等，碳源梯度設(shè)計既能滿足菌體生長需求，同時能實(shí)現(xiàn)外源蛋白 在細(xì)菌達(dá)到飽和生長期后的自動誘發(fā)。同等產(chǎn)量相比傳統(tǒng)LB使用更少培養(yǎng)體積，免去了密切監(jiān)控菌液密度的過程，且無需額外添加IPTG。 本品同樣適用于多克隆表達(dá)，高通量篩選。 產(chǎn)品為粉末A加液體B組合形式，配制方便。 

載體和細(xì)菌菌株 

大腸桿菌自誘導(dǎo)培養(yǎng)基適用于由功能性的lac操縱子（包括lacY和lacZ）控制的表達(dá)系統(tǒng)，如pET系列。表達(dá)菌種可用BL21 (DE3) 。

核心成分

1 碳源梯度設(shè)計：甘露醇→乳糖/甘油（誘導(dǎo)碳源）的代謝切換，觸發(fā)基因表達(dá)。
2 誘導(dǎo)信號分子：乳糖代謝產(chǎn)物作為天然誘導(dǎo)劑I（替代IPTG），更溫和高效。
3 營養(yǎng)配方優(yōu)化：氮源、微量元素等協(xié)同支持高密度發(fā)酵。

使用方法 

1 培養(yǎng)基的配制  

1) 將整包組分A倒入搖瓶中，加入975ml純水，121℃滅菌20min;

2) 冷卻至37℃后，在無菌環(huán)境中加入抗生素（依據(jù)載體中的抗性基因，如100ug/ml氨芐青霉素），最后加入25ml的組分B，并混合均勻。

2 培養(yǎng)基的使用 

方案一 

1) 將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入細(xì)菌，如BL21(DE3)，涂布于自備的LB固體培養(yǎng)基（含抗生素），37℃培養(yǎng)過夜； 

2) 培養(yǎng)體積小于100ml時，直接挑取單克隆菌落至自誘導(dǎo)培養(yǎng)基（含抗生素）中，37℃培養(yǎng)過夜； 

3) 培養(yǎng)體積大于100ml時，挑取單克隆菌落接種到自備的液體LB培養(yǎng)基（含抗生素）中，37℃培養(yǎng)6-8h； 

4) 將所得菌液按百分之一的體積比例加入自誘導(dǎo)培養(yǎng)基（含抗生素）中（例：自誘導(dǎo)培養(yǎng)基體積是1000ml，則加入10ml 菌液）； 

5) 37℃培養(yǎng)18-24h，搖床轉(zhuǎn)速大于180rpm/min； 

6) 收集菌體，檢測目的蛋白表達(dá)情況。

方案二 

對于在低于30℃條件下表達(dá)的蛋白需使用雙溫度培養(yǎng)條件，有些蛋白需在18或25℃表達(dá)可提高蛋白溶解度和降低細(xì)胞毒性。 

1) 第一天，接種菌種至2-10mlLB培養(yǎng)基（含抗生素），在30℃，180rpm/min培養(yǎng)過夜，同時將需使用的自誘導(dǎo)培養(yǎng)基（含抗生素） 在30℃過夜預(yù)熱； 

2) 第二天，將種子液按1：40的比例接種至預(yù)熱的自誘導(dǎo)培養(yǎng)基中； 

3) 在30℃，180rpm/min培養(yǎng)6h，然后將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至18或25℃，180rpm/min培養(yǎng)24-36h；

4) 第三-四天，收集菌體，檢測目的蛋白表達(dá)情況。 

3 菌種裂解 

菌種培養(yǎng)結(jié)束后，培養(yǎng)基離心去掉上清收集沉淀菌泥，對菌體進(jìn)行稱重，記錄重量。進(jìn)行后續(xù)裂解純化步驟。菌泥可用物理破碎法如 超聲、高壓勻漿等，或化學(xué)方法破碎。化學(xué)方法裂解菌泥推薦使用本公司飛刀TM快速裂菌試劑盒（CutE.coilLysisKit）或鐵錘超級裂菌液。 

1) 飛刀TM快速裂菌試劑盒（CutE.coilLysisKit）使用方法：按照1：9（m：V）加入重選液重懸菌體，按照菌體重懸液體積的1/9加 入飛刀TM快速裂菌試劑盒A液，攪拌均勻后室溫裂解5-10min，再加入混合液1/1000體積的B液，攪拌均勻后4-25℃消化核酸5-10min； 

2) 鐵錘超級裂菌液使用方法：按照1：9（m：V）加入重懸液重懸菌體。按照菌體重懸液體積的1/9加入鐵錘超級裂菌液，攪拌或振蕩 混合均勻，置于 4-25℃條件下裂解1-10min；

產(chǎn)品優(yōu)勢

1 操作便捷免去手動誘導(dǎo)步驟，減少人為誤差
2 高產(chǎn)高效延長蛋白表達(dá)時間，提升產(chǎn)量（優(yōu)其對毒性蛋白友好）
3 成本可控省去IPTG等誘導(dǎo)劑費(fèi)用，適合大規(guī)模生產(chǎn)

注意事項(xiàng) 

1) 高壓滅菌后，培養(yǎng)基的顏色可能會加深，這是正常現(xiàn)象，不會影響產(chǎn)品性能； 

2) 未使用完的培養(yǎng)基可在4℃保存一個月； 

3) 由于本方法所得菌液密度大，故需要大量氧氣，因此培養(yǎng)基的體積不能超過三角瓶的五分之一； 

4) 三角瓶底最好是皺褶式的，這樣搖晃中氧氣供應(yīng)更充分； 

5) 為了您的安全和健康，實(shí)驗(yàn)過程中請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套進(jìn)行操作； 

6) 本產(chǎn)品僅限科研使用。