MC3T3-E1成骨誘導分化與檢測試劑盒

產品簡介：

MC3T3-E1成骨誘導分化與檢測試劑盒是專為骨細胞研究設計的實驗工具，適用于體外誘導MC3T3-E1細胞向成骨細胞分化及檢測其分化進程。該試劑盒包含標準化誘導培養基、特異性染色試劑及定量檢測組分，可完整支持細胞形態學觀察、堿性磷酸酶活性檢測及鈣結節形成分析，為骨代謝研究提供可靠實驗方案。

MC3T3-E1成骨誘導分化完全培養基包括成骨誘導培養體系所有成分以及鑒定所用的茜素紅染色液，可用于 MC3T3-E1 成骨誘導分化與染色。

特點優勢：

誘導分化程序簡單便捷

成骨誘導效率高

本產品已經過無菌檢測、 pH 測試、滲透壓檢測、內毒素檢測。

產品組成：

注意: MC3T3-E1成骨誘導分化完全培養基2-8℃保存，1個月有效，請盡快使用。

產品使用：

一：完全培養基的配制方法：

1. 配制前將特級胎牛血清及成骨誘導添加物放置于4℃冰箱內完全融化。

注意: 融化后的血清中可能出現絮狀物，其主要成分為析出的血纖蛋白，這不會影響產品使用效果；如絮狀物較多，可離心去除（不建議過濾，過濾會造成部分營養物質丟失）。

2. 用75%醫用酒精擦拭消毒試劑盒中各瓶/管表面。

3. 將血清和成骨誘導添加物全部加入DMEM低糖培養基中。

4. 輕輕顛倒搖晃配制好的成骨誘導分化完全培養基，使其混合均勻。

特別建議：如短時間內無法使用完全部的培養基，建議按照上述配方比例分批配制；剩余成分可以分裝為合格規格，按各自保存條件儲存，切勿反復凍融。

二：明膠包被培養器皿表面：

1. 為了避免誘導過程中細胞漂浮，建議對成骨誘導使用的培養器皿表面進行明膠包被。

2. 取能覆蓋整個培養皿/板底面量的0.1%明膠入到培養皿/板中，如6孔板中加2mL/孔。

3. 搖勻液體使其覆蓋整個培養皿/板的底面。

4. 將鋪有0.1%明膠的培養皿/板室溫放置（生物安全柜或超凈工作臺中）至少30min以上。

5. 吸棄明膠，待培養皿/板晾干后，1×PBS洗2次，即可用于接種細胞。

注意: 包被明膠的培養皿/板在無菌和明膠不蒸干的條件下，可以在4℃保存兩周。

三：成骨誘導分化操作規程（以6孔板為例）：

1. 當細胞融合度達到80-90%時，消化細胞并計數；

2. 將細胞按照1×10⁵cells/mL的密度接種在包被0.1%明膠的六孔板中，每孔加入2mL正

常培養用完全培養基。

3. 將細胞置于37℃，5%CO₂的培養箱中進行培養。

4. 當細胞匯合度達到60%-70%時，吸棄上清，PBS洗2次，每孔加入2mLMC3T3-E1成

骨誘導分化完全培養基；

5. 每3天全換液MC3T3-E1成骨誘導分化完全培養基（使用前需預熱至37℃）；

6. 誘導2-4周后，視細胞的形態變化及生長情況，用茜素紅染液進行染色。

注意：為防止成骨細胞脫落，建議成骨過程中出現大量鈣結節之后，換液形式變為每兩天一次半量換液。

四：茜素紅染色（以6孔板為例）：

1. 誘導成骨分化結束后，吸棄上清，PBS清洗1-2遍，每孔加入2mL4%多聚甲醛溶液，

固定30min；

2. 將4%多聚甲醛吸凈，PBS清洗2遍。每孔中加入1mL茜素紅染液，染色5-10min；3.吸凈茜素紅染液，PBS清洗2-3遍。

3. 每孔加入1mLPBS，倒置顯微鏡下觀察成骨染色效果。

4. 顯微鏡下可觀察到成骨分化細胞形成大量染成紅色的鈣結節，呈現典型的成骨分化。

圖1                                                                             圖2

         圖1：MC3T3-E1成骨誘導10d染色效果（100X）

         圖2：MC3T3-E1成骨誘導10d染色效果（200X）

注意事項：

1.      本產品所有組分均為無菌包裝，在使用過程中請注意無菌操作，避免微生物污染；若配制過程有污染風險，可將完全培養基過濾除菌。

2.      本產品發貨時使用冰袋運輸，若收到貨后暫時不使用，請按照保存條件將各組分保存。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅用于生命科學研究，不得用于醫學診斷及其他用途！