?

質粒DNA小量抽提試劑盒（離心柱法） 

產品介紹 

本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞，再通過離心吸附柱在高鹽狀態下特異性地結合溶液中的DNA提取質粒DNA。離心吸附柱中采用的硅基質膜能 夠高效、專一吸附DNA，雜質蛋白質及其他細胞內容物被去除達到快速純化質粒DNA的目的。本試劑盒適用于提取1-5ml細菌培養物，質粒提取 得率和質量與宿主菌的種類和培養條件，細胞的裂解，質粒拷貝數，質粒的穩定性，抗生素等因素有關。使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于 各種常規操作，包括測序、體外轉錄與翻譯、酶切、轉化等一些常規的分子生物學實驗。

注意事項 

1 使用前檢查各組分是否出現沉淀。若有，請輕輕搖晃混合均勻，或37℃水浴重新溶解。 

2 第一次使用前請將RNase 全部加入溶液 P1中，混勻后置于2-8℃保存。 

3 洗滌液 I、洗滌液 II使用前請按標簽提示加無水乙醇，并混合均勻。

使用流程

提取步驟

1 取1-5ml 細菌培養物，加入離心管中，使用常規臺式離心機12,000rpm（~13,400×g）離心1 min ，盡量吸盡上清。（菌液較多時可以通 過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。 

2 向留有菌體沉淀的離心管中加入250 μl 溶液 P1（請先檢查是否加入RNase），使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌沉淀將菌體充分 懸浮。

注意：如果菌體未徹底混勻，質粒提取量和純度會偏低。 

3 向離心管中加入250 μl 溶液 P2，溫和的上下翻轉6-8次使菌體充分裂解，室溫靜置1~ 5 min（時間不宜過長），以免質粒DNA受到破壞。 

4 向離心管中加入350 μl 溶液 P4，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻，此時會出現白色絮狀沉淀。12,000rpm（~13,400×g）離心 5min。 

5 將上一步收集的上清液全部轉移到吸附柱 AP50中（吸附柱放入收集管中），注意盡量不要吸出沉淀。12,000rpm（~13,400×g）離心 1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱AP50放入收集管中。 

6 向吸附柱AP50中加入500ul洗滌液I（請先檢查是否加入無水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）離心 1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱AP50放入收集管中。

7 向吸附柱AP50中加入500μl 洗滌液 I（I請先檢查是否加入無水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）離 心 1min ，倒掉收集管中的廢液，將吸附 柱AP50 放入收集管中。 

8 重復操作步驟7 。 

9 將吸附柱AP50放入收集管中，12,000rpm（~13,400×g）離 心 2min，目的是將吸附柱中殘余的洗滌液 II去除，否則洗滌液 II中的乙醇會影 響后續的實驗如酶切、PCR等。 

10 將吸附柱AP50置于一個干凈的離心管中，向吸附柱膜的中間部位懸空滴加50-100μl洗脫液，室溫放置2min，12,000rpm（~13,400×g） 離心2min將質粒溶液收集到離心管中，如不立即進行下游實驗，于-20℃保存備用。洗脫緩沖液體積不應少于50μl，體積過小影響回收效率。為了增加質粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置2min，12,000rpm離心1min。

低拷貝或大質粒（＞10 kb）提取

如果所提質粒為低拷貝或大于10kb的大質粒，應加大菌體用量，使用5-10ml過夜培養物，同時按照比例增加溶液P1、溶液 P2和溶液P4的 用量，洗脫液應在65-70℃水浴預熱，在吸附和洗脫步驟時可以適當的延長時間，以增加提取效率，其他步驟相同。

?