單克隆抗體的生產涉及將骨髓瘤細胞與脾細胞融合,并在含有次黃嘌呤-氨甲蝶呤-胸苷(HAT)補充培養基中選擇雜交瘤(細胞雜交體)。氨甲蝶呤通過抑制二氫葉酸還原酶阻斷DNA的合成。缺乏利用核苷酸補救途徑能力的細胞會被淘汰。具有次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(HPRTase)和胸苷激酶(TK)酶的細胞,在提供次黃嘌呤和胸苷的情況下可以利用補救途徑。
這種培養基的目的在于:(1)選擇性地殺死那些適應組織培養、否則會勝過任何產生的雜交瘤的未融合骨髓瘤細胞;(2)消除缺乏HPRT酶的骨髓瘤-骨髓瘤雜交瘤。HPRT酶陽性的脾臟-脾臟雜交瘤雖然對氨甲蝶呤不敏感,但在培養中通常壽命較短。
在選擇完成后(大約10-14周),通過在含有次黃嘌呤-胸苷(HT)的培養基中多次傳代(大約2-3周)將氨甲蝶呤從培養物中稀釋,然后再轉移到正常雜交瘤生長培養基中。