EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑

NoninBio轉(zhuǎn) 染 試 劑 對(duì)標(biāo)產(chǎn)品列表

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑是一款體內(nèi)專用型基因轉(zhuǎn)染試劑，可通過肌肉注射的方式將mRNA遞送傳送至體內(nèi)并在注射部位高效表達(dá)目的蛋白。與其它mRNA專用體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑相比，具有操作簡(jiǎn)便、體內(nèi)毒性低、穩(wěn)定性好、體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率及蛋白表達(dá)量高等優(yōu)點(diǎn)。

應(yīng)用范圍:

EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑可被應(yīng)用于mRNA疫苗研發(fā)或基因治療等相關(guān)工作的研究中。可用于遞送熒光標(biāo)記的mRNA或具有特殊功能的mRNA，并在體內(nèi)高效表達(dá)。可滿足基礎(chǔ)科研、初期工藝開發(fā)及臨床前實(shí)驗(yàn)研究使用。

保存條件: 

2-8℃保存一年

運(yùn)輸：

常溫運(yùn)輸

體內(nèi)轉(zhuǎn)染方法:

以體重20g小鼠，mRNA注射10μg為例，參考表1調(diào)整，步驟如下：

體內(nèi)轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化:

可通過改變mRNA的用量和濃度以及EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑濃度對(duì)體內(nèi)分布或蛋白表達(dá)情況進(jìn)行優(yōu)化。EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑(μL): mRNA (μg)可以在4:1和2:1之間調(diào)整。根據(jù)鼠體重的不同，葡萄糖注射液的補(bǔ)加體積可以在推薦量±30μL之間調(diào)節(jié)。優(yōu)化方法參考表2。使用熒光標(biāo)記mRNA的活體分布實(shí)驗(yàn)，建議在注射后4-6小時(shí)開始檢測(cè)，熒光素酶標(biāo)記mRNA的活體分布實(shí)驗(yàn)，建議在注射后6小時(shí)開始檢測(cè)。

表1.  不同體重鼠的體內(nèi)用量推薦

表2.  體重20g鼠的優(yōu)化復(fù)合方式推薦

一：轉(zhuǎn)染效率低

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先，與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān)，有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染，如HeLa、B16F10、293T等。有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān)，在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后，沒有使用最適宜的細(xì)胞密度，應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種，更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。

二：轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定，不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān)，一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性，另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑，則不建議反復(fù)凍融，會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化。基因如短時(shí)間內(nèi)連續(xù)使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存以降低核酸的降解速度。

三：細(xì)胞毒性大

導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作，以避免細(xì)胞毒性大的問題。

四：沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

沒有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先，可能是沒有選對(duì)合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時(shí)應(yīng)考慮基因的種類及分子量等因素。其次，有的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)血清的影響很大，應(yīng)在無血清情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly?  系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對(duì)轉(zhuǎn)染體系的影響，可在含血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

五：使用錯(cuò)誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑，都應(yīng)嚴(yán)格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作，其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時(shí)間、檢測(cè)時(shí)間等重要因素。

六：轉(zhuǎn)染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員。基因轉(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài)，呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲(chǔ)存溫度太低，請(qǐng)務(wù)必按照試劑說明書要求的溫度進(jìn)行儲(chǔ)存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象，建議溫浴10分鐘后，觀察是否澄清。

七：轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀

當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量，或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時(shí)，由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴(yán)格參考說明書的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

八：siRNA轉(zhuǎn)染時(shí)，基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解？或所使用的細(xì)胞是否為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞？以及是否按照說明書建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑，確保細(xì)胞密度在60-70%之間，并嚴(yán)格按照說明書建議的用量去使用操作。

九：DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí)，基因沉默效率不夠高

當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時(shí)，建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進(jìn)行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復(fù)合，再將兩個(gè)復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機(jī)理不相同，如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染兩種基因，建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑，如EZ poly? 系列的DNA/RNA產(chǎn)品，即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。