線粒體熒光探針（Probes for Mitochondria）產品專題

基本介紹：

線粒體（Mitochondrial）是一種存在于大多數真核細胞中的由兩層膜包被的細胞器，約占細胞體積10%。作為一種多形細胞器，其結構因細胞類型、細胞周期狀態意思胞內代謝狀態而不斷變化。線粒體至關重要的功能是由氧化磷酸化（Oxphos）和脂質氧化介導的能量產生。線粒體內還參與其他幾種代謝活動，包括尿素生成，血紅素和非血紅素鐵和類固醇生物起源，以及胞內鈣離子（Ca²⁺）穩態。線粒體還在凋亡中發揮重要作用。目前對線粒體參與生理功能的了解只有很少一部分，而對其作用機理和調控方式的了解就更少。

線粒體（Mitochondrial）的分布依據細胞能量水平而變化，是細胞類型、細胞周期狀態和增殖情況的一種功能表現。比如，褐色脂肪組織細胞，肝細胞和某些腎上皮細胞富集存在于活躍線粒體中，而靜息免疫系統祖細胞或前體細胞使用線粒體選擇性探針染色率很低。阿爾茨海默病線粒體數目減少，且其蛋白和核酸易被包括一氧化氮在內的活性氧（ROS）所攻擊造成損傷。

我司提供一系列線粒體選擇性熒光探針和有機染料，能夠用來監測細胞形態和細胞器功能。大多數線粒體選擇性有機染料的攝取依賴于線粒體膜電位。因此這些染料能讓研究者標記線粒體活動、定位、含量，以及觀察一些能改變線粒體功能的某些藥物的生理效應。

線粒體探針：

一、MitoTracker Probes（可固定的線粒體選擇性探針）

1）傳統線粒體探針的缺點：

傳統線粒體探針如羅丹明123（Rhodamine 123）（貨號：NBS3208）雖然可立即聚集在功能線粒體上，然而，一旦線粒體膜電位喪失，這些探針就能很容易清洗掉離開細胞。當碰到細胞需要進行醛類固定或細胞內含影響膜電位藥物的實驗中，這些探針則受到限制，不可使用。

2）MitoTracker線粒體探針的優點

Mitotracker正克服傳統探針的缺點而被生產，其能夠聚集在活線粒體上，并且細胞固定中也能良好維持。其中，Mitotracker orange，red，and deep red這三種探針經透化（permeabilization）后仍能良好維持。在接下來免疫細胞化學（ICC）、原位雜交（ISH）或電鏡實驗的處理步驟中樣本仍保留線粒體的活細胞染色形態。另外，Mitotracker探針去除病原細胞線粒體染色可能遇到的一些問題，因為一旦線粒體染色后，細胞即可被固定然后進行結果分析。

3）MitoTracker線粒體探針產品

我們提供7種Mitotracker探針，它們在光譜特性、氧化態以及可否固定幾個參數上有所差異，具體見下表。

【注1】：MitoTracker? Green FM（貨號：M7514）在水溶液中無熒光；

【注2】：MitoTracker? Orange CM-H2TMRos（貨號：M7511），MitoTracker? Red CM-H2XRos（貨號：M7513）為還原態探針，無熒光。只有被氧化后才發熒光。

4）MitoTracker線粒體探針訂購信息

訂購信息：

以上所有產品均為Life（Invitrogen）原裝正品，原始包裝為20x50 μg（20支50μg單個包裝構成）。我司對M7510 ，M7512，M7513，M7514，M22426進行拆開現貨銷售，歡迎訂購。

二、MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator（線粒體超氧化物探針）

1）背景介紹

線粒體超氧化物（Mitochondrial superoxide）是氧化磷酸化的副產物。一條緊密偶聯的電子運傳遞鏈中約1-3%被消耗的線粒體氧不能完全被還原，這些‘遺漏’的電子能與分子氧快速反應產生超氧陰離子，即線粒體中含量最高的活性氧（ROS）分子。細胞過氧化物生成量的增加在心血管疾病中得到闡釋，這些疾病包括高血壓、動脈粥樣硬化和糖尿病相關的血管損傷，以及神經退化疾病如帕金森疾病，阿爾茨海默病和肌萎縮性[脊髓]側索硬化（ALS）。

2）產品描述

MitoSOX紅色線粒體超氧化物熒光探針（MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator）是二氫乙啶（dihydroethidum，DHE）的一種陽離子衍生物，特別設計高度特異性檢測活細胞線粒體超氧化物。

MitoSOX Red是一種特異性靶向活細胞線粒體的新型熒光探針，具細胞膜滲透性，且能快速和選擇性結合線粒體。一旦進入線粒體，被超氧化物氧化，與核酸結合后產生很強的紅色熒光。MitoSOX Red能夠立即被超氧化物，并不是其他ROS-或RNS（活性氮）生成系統氧化。超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）能夠預防MitoSOX Red被氧化。

MitoSOX Red可用于在對活細胞線粒體釋放的超氧化物的直接檢測中區別純化線粒體的人為誤差。另外，MitoSOX Red是一種有價值的工具，用來篩選多種疾病中調節氧化應激的藥物。

3）產品特點

? 容易為超氧化物而不是其他的ROS、RNS生成系統氧化

? 吸收波長?發射波長最大值：~510?580 nm

? 用于活細胞成像

  快速選擇性靶向線粒體

4）MitoSOX Red訂購信息

以上所有產品均為Life（Invitrogen）原裝正品，原始包裝為10x50 μg（10支50μg單個包裝構成）。我司對M36008進行拆開銷售，特惠價為750元/支，單支50μg，現貨銷售，歡迎訂購。

三、JC-1/JC-10線粒體膜電位檢測探針（早期凋亡檢測）

1）背景介紹

線粒體膜通透性的改變是細胞早期凋亡發生的重要特征之一。

凋亡早期，線粒體膜通透性增加，線粒體蛋白包括：細胞色素C、Smac/DIABLO、HtrA2/OMI、核酸內切酶G（EndoG）、凋亡誘導因子（AIF）等，從線粒體基質釋放到細胞漿。細胞色素C的釋放伴隨著線粒體膜電位的喪失，呼吸鏈障礙，鈣離子的釋放。

線粒體膜電位的破壞是誘導細胞凋亡后最早發生的胞內事件，目前常用一些親脂性陽離子染料如JC-1，JC-10，羅丹明123（Rhodamine 123）等在線粒體膜電位變化中聚合形式的差異來區分正常細胞和凋亡細胞。基本原理是：正常細胞中陽離子染料在線粒體中積累并聚合，聚合物發出強烈的紅色熒光；凋亡細胞中由于線粒體膜電位的喪失，染料不能在線粒體中積累并以單體形式存在于胞漿中，單體發出綠色熒光。

2）產品描述

JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電△Ψm位的理想熒光探針。JC-1染料以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內，可以用來檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內，JC-1聚集在線粒體基質中形成聚合物，聚合物發出強烈的紅色熒光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的線粒體由于膜電位的下降或喪失，JC-1只能以單體的形式存在于胞漿中，產生綠色熒光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不僅可用于定性檢測，因顏色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測，因線粒體的去極化程度可以通過紅/綠熒光強度的比例來衡量。

JC-10是JC-1的升級產品，優勢在其比JC-1具更好的水溶性，特別適合替代需要更好染料濃度的實驗。JC-10的檢測原理同JC-1。

3）訂購信息

相關產品（凋亡誘導劑）：

線粒體凋亡研究中常需要陽性誘導劑建立陽性的凋亡模型，從而用于細胞凋亡機理或凋亡相關藥物的篩選。

CCCP，即Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone，一種質子載體（H+ionophore），是一種強效的線粒體氧化磷酸化解偶聯劑，促使線粒體內膜對H+產生通透性，導致線粒體內膜兩側的膜電位喪失，誘導凋亡發生。也可作用于葉綠體膜，抑制光合作用；CCCP還可抑制內質網-高爾基體（ER-Golgi）之間的蛋白轉運，高親和力結合細胞色素C氧化酶。

FCCP，即Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone，一種質子載體（H+ionophore），也是一種強效的線粒體氧化磷酸化解偶聯劑，促使質膜和線粒體膜去極化。