鈣離子載體/探針（Calcium ionophores/indicators）產品專題

?? 載體：A23187 / 4-bromo-A23187 /Ionomycin

?? 探針：Fluo-3, AM/Fluo-4, AM/Rhod-2, AM/Rhod-4, AM（可見光激發）

?? 探針：Fura-2, AM/Indo-1, AM（紫外光UV激發）

?? 螯合劑：EGTA（金屬螯合劑）

背景描述：

鈣（Calcium）是一種重要的且普遍存在的第二信使，參與調控各種各樣的細胞過程，包括細胞增殖，基因轉錄，肌肉收縮和胞吞作用。響應于大量的刺激物，鈣離子（Ca²⁺）從胞內的儲存池釋放出來；而胞內Ca²⁺濃度的增加會引起細胞功能的活化、調節和終止。許多泵和離子通道都允許這種獨特的陽離子進入和離開細胞，并且在細胞質和胞內蓄池間移動。

我司提供各種優質的指示劑/探針來檢測Ca²⁺釋放；Ca²⁺螯合劑和離子探針用做對照，以檢測鈣離子信號通路調控的酶活性。

? A1. 鈣離子載體（Ca²⁺ ionophores）基本介紹

1）.  A23187（CAS NO：52665-69-7），由于能夠非常明顯的提高二價陽離子穿透生物膜，呈現出離子載體（ionophore）特性。A23187對Ca²⁺具有高度的選擇性，因此常用來增加完整細胞的胞內Ca²⁺水平，進而研究胞內Ca²⁺介導的生理事件。含內源性的UV激發的自熒光，不能與UV激發的Ca²⁺指示劑聯合使用，比如：Fura-2。但仍可與長波長激發的鈣離子指示劑，如Fluo-2聯合使用。 

2）.  4-Br- A23187（CAS NO：76455-82-8），高度選擇性的Ca²⁺載體，能夠提高胞內Ca²⁺水平。通常用做熒光探針確定胞內Ca²⁺水平的校準標準品（calibration standard），用來平衡胞內外的Ca²⁺水平，以及運載Mn²⁺進入細胞以淬滅胞內探針的熒光。作為抗生素A23187的鹵化衍生物，基本沒有內源熒光，可與UV激發的Ca²⁺指示劑如Fura-2，Indo-1，Quin-2，以及可見光激發的指示劑如Fluo-4，Fluo-3，Rhod-2聯合使用。還能用來平衡胞內外Mg²⁺濃度，適合校準Mg²⁺指示劑。 

3）.  離子霉素（Ionomycin，CAS：56092-81-0），一種有效的Ca²⁺載體，通常用來校準熒光Ca²⁺指示劑以及修飾胞內Ca²⁺濃度，以及用在對細胞過程中Ca²⁺的調控特性的研究中；

? A2. 鈣離子載體訂購信息：

? B1. 可見光激發鈣離子指示劑（Visible-lightexcitable Ca²⁺ indicators）的優勢

與紫外光激發的熒光探針相比，如Fura-2和Indo-1，可見光激發Ca²⁺探針具有以下特點：

1）適用于大多數的激光共聚焦鈣離子濃度檢測系統，包括共聚焦激發掃描顯微鏡以及流式細胞儀等。

2）具有更強的染料吸收性能，使得更低濃度的探針即可成功檢測Ca²⁺變化，從而降低了對活細胞的光毒性。

3）Ca²⁺依賴性熒光強度增強，對Ca²⁺變化水平檢測敏感度更高。

4）降低樣品自熒光以及光散射的干擾。

5）兼容光激活探針以及UV-激發試劑，因此更方便于多參數檢測。

6）無光譜偏移。

? B2. 常見的幾種可見光激發鈣離子指示劑基本介紹

1）. Fluo-3, AM（CAS NO：121714-22-5），常用的可見光激發波長Ca²⁺熒光探針，具有較高的Ca²⁺捕獲能力，通過熒光強度的變化直接反映Ca²⁺信號的動力學變化。當Fluo-3以游離配體形式存在時幾乎是非熒光性的，但一旦與Ca²⁺結合即可產生很強的熒光，熒光信號增強60~80倍，此時的最大激發波長為506nm，最大發射波長為526nm。可通過激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標儀等來檢測胞內鈣離子水平的變化。 

2）. Fluo-4, AM（CAS NO：273221-67-3），Fluo-3的改良版本，通過將Fluo-3結構上的氯離子（Cl-）替換為電子吸引力更強的氟離子（F-），使得最大激發波長往短波長偏移10nm左右。正由于這個波長更接近氬激光器的波長，則當使用氬激光器來激發探針Fluo-4，能夠得到更強的熒光強度，比Fluo-3強一倍。另外，Fluo-4的Ca²⁺親和力幾乎接近Fluo-3（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM），因此，使用上幾乎同Fluo-3。Ca²⁺結合后的最大激發波長為494nm，最大發射波長為516nm。 

3）. Fluo-8, AM，目前最亮的可見光激發波長Ca²⁺熒光探針，其熒光強度比Fluo-4強兩倍，比Fluo-3強四倍。 

4）. Rhod-2, AM（CAS NO：129787-64-0），一種高親和力的可見光激發波長Ca²⁺熒光探針。類似于Fluo-3或Fluo-4，其激發和發射光譜不會隨著Ca²⁺濃度變化發生明顯的遷移，熒光信號一旦與Ca²⁺結合后明顯增強。不同于Fluo-3或Fluo-4，Rhod-2的波長更長（Ex/Em=549/578 nm，Ca²⁺結合），這一特性使其更適合具高水平自熒光信號細胞或組織的Ca²⁺水平檢測，還可用來檢測由光感受器和籠鎖Ca²⁺螯合劑光激活導致的Ca²⁺釋放。

? B3. 可見光激發鈣離子訂購信息: 

? C1. 紫外光激發鈣離子指示劑（UV-excitable Ca²⁺ indicators）基本介紹

1）. Fura-2, AM（CAS NO：108964-32-5），一種常用的紫外光激發和比率測定型Ca²⁺熒光探針。一旦與Ca²⁺結合后，Fura-2的最大激發波長發生藍色遷移，由原來的363nm（Ca²⁺-free）遷移到335nm（Ca²⁺-saturated），而最大發射波長基本未變化，保持在510nm左右。通常情況，分別用最大激發波長340nm和380nm來激發Fura-2，且用340/380nm激發下的熒光比值來檢測細胞內Ca²⁺濃度。使用比值檢測，可消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，探針的滲漏，細胞厚度差異等因素導致的檢測誤差。 

2）. Indo-1, AM（CAS NO：112926-02-0），一種常用的紫外光激發和比率測定型Ca²⁺熒光探針。一旦與Ca²⁺結合后，Indo-1的最大發射波長向短波長遷移，由原來的475nm（Ca²⁺-free）遷移到401nm（Ca²⁺-saturated），而最大激發波長無明顯變化，維持在346nm~ 330nm范圍內，適宜用氬離子激發器的UV激發光譜（351~364nm）進行熒光激活。因此，不同于Fura-2，Indo-1是發射波長率圖Ca²⁺熒光探針，特別適合流式細胞儀檢測，因其可在控制單一激發波長的條件下輕易調整發射濾片，也特別適合多色熒光檢測。使用發射波長下熒光強度的比率來測定細胞內Ca²⁺濃度，可消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，探針的滲漏，細胞厚度差異等因素導致的檢測誤差。實際檢測，推薦使用最大發射波長分別用405nm和485nm。

? C2. 紫外光激發鈣離子指示劑訂購信息: 

? D1. 鈣離子螯合劑（EGTA）基本介紹

EGTA，英文名Ethylene Glycol Tetraacetic Acid，中文名乙二醇雙(2-氨基乙基醚)四乙酸，CAS：67-42-5，各種緩沖液中的一種重要化學試劑。最廣泛使用的一種鈣離子螯合劑，可在鎂離子Mg²⁺存在情況下，用來測定鈣離子，因鈣離子Ca²⁺-EGTA復合物的穩定性約比Mg²⁺-EGTA復合物強100,000倍。可用來制備鈣離子緩沖液和調控鈣離子濃度。

常在鈣離子載體如Ionomycin（離子霉素）存在的條件下，使用CaEDTA buffer原位校準細胞內鈣離子指示劑。

? D2. 鈣離子螯合劑（EGTA）產品訂購：

注意事項：

1.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。