ENDOCLING? 內毒素去除試劑盒

產品介紹 

1 內毒素介紹 

內毒素脂多糖分子(LPS)是革蘭氏陰性細菌細胞壁的主要成分，由菌體特異性多糖、非特異性核心多糖和脂質A三部分構成。內毒素對哺乳 動物有很顯著的致熱性，少量的內毒素靜脈注射就可以引起發燒，大劑量時可以引起感染性休克、敗血癥、多器官功能性衰竭等。生物制藥中 抗體藥作為一類靶向藥物由于用量較大，對內毒素限度的要求更高，由于抗體藥生產和純化工藝都十分復雜，有諸多環節可能將內毒素帶入 其中，因此簡單且快速的去除內毒素可以為產品的研發、生產提供有利保障。 

2 試劑盒組分 

ENDOCLING?是一款高效內毒素去除試劑盒，它以內毒素結合蛋白作為配體通過化學鍵固定在聚合物磁性微球上，由于其帶有磁性，進行特 異性的內毒素清除后很容易進行分離和去除，經ENDOCLING?內毒素去除試劑盒純化的樣品最終內毒素低于2EU/ml。 

保存與運輸 

運輸：冰袋運輸，不可凍結。 保存：2-8 ℃冷藏保存，不可凍結。

產品特點 

1) ENDOCLING? 內毒素去除試劑盒更適用于內毒素含量不超過4000EU/ml的樣品，隨著內毒素含量的增加去除效果會下降，不建議使用本 產品去除內毒素含量超過10000EU/ml的樣品，在含有2500EU/ml、250EU/ml、25EU/ml、2.5EU/ml 脂多糖(Escherichia coli O55:B5)的樣 品中，可以一次性將內毒素去除至2EU/ml以下； 

2) ENDOCLING? 內毒素去除試劑盒操作步驟簡單，只需要將ENDOCLING?內毒素去除磁珠清洗后加入樣品中搖晃孵育60min，通過磁力架 富集磁珠就可以去除樣品中的內毒素； 

3) ENDOCLING? 內毒素去除試劑盒不會影響樣品性狀如質粒的超螺旋、抗體的純度，且能夠在溫和的條件下特異性吸附內毒素，產品回收率≥ 95%； 

4) 產品使用方便，ENDOCLING?內毒素去除試劑盒中提供無熱源清洗緩沖液、移液槍頭、磁力架（可選）等。

使用方法 

1 計算磁珠使用量 磁珠使用量需要考慮兩個因素：首先需要根據磁珠載量判斷使用量，1ml內毒素去除磁珠可去除20000-25000EU內毒素，根據樣品中內毒 素的含量計算出使用磁珠的體積，比如1ml的樣本中含有2000EU的內毒素，而1ml磁珠可去除20000EU內毒素，計算得出加入100μl磁 珠即可達到去除內毒素的目的；其次需要根據樣本體積來決定最終的磁珠使用量，為了保證磁珠和樣品中的內毒素充分接觸，磁珠的使用體 積不能低于樣本體積的10%,比如20ml樣本中含有20000EU內毒素，根據載量判定1ml磁珠已經夠用，但由于樣本體積為20ml，需要加入 2ml 的磁珠進行內毒素去除。 

2 清洗磁珠 磁珠使用前上下顛倒混勻，用無熱源槍頭吸取對應體積的內毒素去除磁珠于無熱源的離心管中（請在無菌環境下如超凈臺或者生物安全柜中 取用）并放置在磁力架上。待磁珠全部吸附至管壁后去除保護液，加入3倍體積的ENDOCLING?Wash Buffer重懸磁珠，輕輕顛倒混勻3-5次， 再將懸液置于磁力架上，同樣待磁珠完全吸附在離心管壁后吸棄上清，重復3-5次。 

3 內毒素去除 加入少量體積的樣本重懸內毒素去除磁珠，再將重懸后的磁珠全部加入樣品中，4℃或者常溫搖晃孵育60min，最后將樣品和內毒素去除磁珠 的混合物放置于磁力架上，待磁珠完全吸附在離心管壁后吸出樣品進行后續檢測。

注意事項 

1) 本產品保存在2-8℃冰箱中，不要凍結保存； 

2) 本產品出現輕微團聚屬正常現象，可正常使用； 

3) 樣品保護液中不能含有去污劑，去污劑不但會影響內毒素的檢測也會影響和磁珠的結合； 

4) 樣品保護液pH 需調整至4.5-8.5，NaCl濃度不超過0.3M； 

5) 吸取磁珠時盡量在無菌環境中取用，未使用的磁珠保存時蓋緊管蓋，可用封口膜封口保存。

參考信息 

質粒內毒素的去除，需求：10mg質粒，內毒素＜2EU/mg，超螺旋≥90%。 

1) 采用柱提法進行質粒抽提，最終抽提12mg質粒，濃度1.1mg/ml，體 積 10.9ml，采用鱟試劑測得內毒素100-200EU/mg； 

2) 加入1ml已經清洗過的磁珠于質粒中常溫搖晃孵育60min； 

3) 將含有磁珠的樣品管轉移到磁力架上，分離磁珠和液體，吸出上清進行內毒素檢測； 

4) 結果：內毒素含量1-2EU/mg，濃 度 1.09mg/ml，體 積 10.8ml，總 量 11.3mg，回收率為98%，

常見問題與解答 

1 為什么使用ENDOCLING?內毒素去除試劑盒沒有將樣品中內毒素去除或者去除效果不明顯？ 

1) 樣品中內毒素的含量過高，通常商業化的質粒小抽試劑盒抽提質粒的內毒素很高，需要加入較多的內毒素去除磁珠才能進行內毒素的去 除； 

2) 內毒素的測定一般是使用鱟試劑，而鱟試劑除了能夠檢測革蘭氏陰性細菌分泌的細菌內毒素還有真菌分泌的β-葡聚糖，β-葡聚糖能夠激 活G因子導致鱟試劑凝固，而ENDOCLING?內毒素去除試劑盒不能有效去除樣品中的β-葡聚糖，只能夠特異性吸附革蘭氏陰性細菌分泌 的細菌內毒素； 

3) 樣品體積過大，磁珠投入量過少同樣會導致內毒素去除不徹底，這種情況我們建議可以二次去除，即再投入一定量的磁珠進行二次去除； 

4) 內毒素帶有強烈的負電荷，這種性質導致內毒素和某些樣本的結合非常牢固，如果用ENDOCLING?內毒素去除試劑盒去除內毒素后效果 不明顯或者樣品損失大極有可能是這種原因，此時可以適當的調整樣品緩沖液的pH和電導（鹽濃度），會對內毒素的去除有一定的幫助。

2 內毒素含量非常高，是否有內毒素去除整體解決方案？ 

通常原核表達的樣本內毒素含量非常高，目前常用的方法是使用離子柱或者PMB親和填料將大量的內毒素去除，一般可以將內毒素去除至 2000-5000EU/ml 左右，但這些方法的弊端是很難再將樣品中的內毒素去除的更低；而 ENDOCLING? 內毒素去除試劑盒最大的特點是將 2000EU/ml 以內的內毒素去除至 2EU/ml 以下，所以我們推薦客戶可以先嘗試離子柱或者 PMB 親和填料去除大量的內毒素，再用 ENDOCLING?內毒素去除試劑盒進行內毒素殘留的去除。