氧化應(yīng)激檢測(cè)用探針（橙色）

ROSBrite 570, for oxidative stress detection 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

活性氧（Reactive oxygen species, ROS）是一類含氧的化學(xué)性質(zhì)活躍分子，包括超氧化物、羥基自由基、單線態(tài)氧和過氧化物。由于存在未配對(duì)價(jià)殼電子，ROS具強(qiáng)反應(yīng)性。ROS在細(xì)胞信號(hào)通路和穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要的作用，在氧的正常代謝下形成天然副產(chǎn)物。然而，在環(huán)境應(yīng)激比如紫外照射或熱曝光，ROS水平急劇上升，對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)造成顯著損傷，這就是所謂的氧化應(yīng)激（Oxidative stress）。處于氧化應(yīng)激條件下，ROS產(chǎn)量急劇提高，引起下游的膜脂質(zhì)、蛋白和核酸發(fā)生結(jié)構(gòu)變化。這些分子的氧化損傷與衰老以及大量病理事件相關(guān)，包括動(dòng)脈粥樣硬化、癌變、缺血再灌注損傷和神經(jīng)衰退紊亂。

ROSBrite 570是一種新型熒光探針，用來測(cè)定細(xì)胞氧化應(yīng)激。具細(xì)胞膜滲透性，本身無熒光，一旦被ROS氧化后，產(chǎn)生明亮的橙色熒光（Ex/Em=556/566nm）。這一熒光可用熒光顯微鏡、高通量成像儀、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，至少1年有效。 

產(chǎn)品使用：

1、 儲(chǔ)存液制備

將低溫保存的產(chǎn)品從冰箱取出，置于室溫回溫至少20min。低速離心3-5min。之后往瓶?jī)?nèi)加入適量無水DMSO充分溶解配成10~20mM儲(chǔ)存液（比如，1mg ROSBrite 570（MW:732.81）加入136μl DMSO，充分溶解混勻后即得到10mM儲(chǔ)存液）。按照單次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，至少3個(gè)月穩(wěn)定。

2、 工作液準(zhǔn)備

正式實(shí)驗(yàn)前，或取粉末按照【儲(chǔ)存液制備】用DMSO溶解，或于室溫融化一管DMSO儲(chǔ)存液。

用HBSS、PBS或其他緩沖液稀釋儲(chǔ)存液到適宜的工作濃度（比如：比如：5-10μM工作液），適宜的工作液濃度請(qǐng)自行優(yōu)化。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、 操作方法（針對(duì)細(xì)胞）

3.1 用藥物處理細(xì)胞。

3.2用PBS清洗細(xì)胞1-2次。

3.3 更換含ROSBrite 570的染色工作液（步驟2新鮮配制）加入細(xì)胞，于37℃孵育15~30min。按照自身實(shí)驗(yàn)需求來優(yōu)化探針的工作濃度和加載時(shí)間。

3.4更換不含染料的HHBS或其它生理緩沖液加入細(xì)胞。

3.5用適宜的儀器來檢測(cè)。（比如：熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀等。

附錄I 活性氧檢測(cè)探針匯總表：

注意事項(xiàng)：

1.      整個(gè)操作過程中注意避光。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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