高爾基體綠色熒光探針

NBD C6-Ceramide 

我司提供多款高爾基體（Golgi apparatus）熒光探針:

【1】NBD C6-Ceramide【綠色熒光，適用于活細胞和固定細胞】

【2】BODIPY?TR Ceramide【紅色熒光，適用于活細胞】

【3】BODIPY?FL Ceramide【綠色熒光，適用于活細胞，可能某些情況下也呈現紅色熒光，取決于在細胞內的定位】

產品簡介：

NBD C6-Ceramide是一種熒光鞘脂類似物，常用來研究鞘脂運輸和代謝機制。也常用作活細胞和固定細胞內高爾基體的選擇性染色劑。環境敏感性的NBD染料在水溶性環境下呈弱熒光，但在非質子溶劑和其它非極性環境內熒光增加，最大激發和發射波長約為466/536nm。

                                                          Fig. NBD C6-Ceramide的激發和發射光譜圖 

產品特性：

1）CAS NO.：94885-02-6

2）化學名：Hexanamide, N-[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)-3-heptadecenyl]-6-[(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol- 4-yl)amino]

3）同義名：C6 NBD Ceramide; (6-((N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)hexanoyl)sphingosine);

4）分子式：C30H49N5O6

5）分子量：575.74

6）純度：≥98%

7）  Ex/Em：466/536nm (in MeOH)

8）  溶解性：溶于DMSO、DMF、氯仿

9）化學結構圖：

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，至少1年有效。

產品使用：

1.NBD C6-Ceramide工作液的配制

① 將低溫保存的產品從冰箱取出后置于室溫至少20min，低速離心后，往1mg凍干粉內加入347μl高質量無水DMSO，使其充分溶解，即配制得到5mM的儲存液。根據單次用量分裝置于-20℃凍存，避免反復凍融。

② 吸取一定量NBD C6-Ceramide（5mM）儲存液按照1：1000的比例用HBSS/HEPES來稀釋，混勻后即為NBD C6-Ceramide工作液（5μM），工作液請現配現用。

【注意】：NBD C6-Ceramide的工作濃度請結合實驗目的以及實驗對象進行適當調整。

2.活細胞高爾基體的熒光標記

① 去除細胞培養液，用適量的溶液如HBSS/HEPES或其他緩沖液來洗滌生長在蓋玻片上的細胞。

② 去除洗滌液，加入新鮮配制的NBD C6-Ceramide工作液（5μM），4℃孵育30min。

③ 吸走染色液，用冰浴預冷的細胞培養液洗滌細胞3次左右，換新鮮培養液37℃再孵育30min。

④ 用新鮮培養液再洗滌一次，隨后用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡進行觀察。此時可觀察到高爾基體呈明亮的強熒光染色，而細胞內的其他膜系統呈比較微弱的熒光染色。

3.固定細胞高爾基體的熒光標記

文獻報道NBD C6-Ceramide適用于固定細胞染色，而BODIPY FL C5-ceramide和BODIPY TR-ceramide不適合。染色條件總的來說沒那么嚴格。然而，避免使用去污劑和甲醇/丙酮固定劑。

注意事項：

1.      整個染色過程中需注意避光。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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