植物過氧化氫染色液(DAB,pH5.5)

產(chǎn)品簡介：

植物組織在脅迫環(huán)境條件下會產(chǎn)生多種活性氧（ROS），ROS活性非常大且極其不穩(wěn)定，因此ROS 的檢測通常因其最終產(chǎn)物而定。過氧化氫是活性氧的一種。在過氧化氫酶的催化下，過氧化氫能與DAB（3,3-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽）迅速反應(yīng)生成棕紅色化合物，從而定位組織中的過氧化氫。

植物過氧化氫染色液(DAB,pH5.5)根據(jù)上述基本原理也稱為DAB染色法，用于植物活組織中的過氧化氫染色。一般應(yīng)用于較嫩的根尖、葉片等的整體染色，染色后有過氧化氫聚集的部位呈棕色至深棕色。

保存條件: 

4℃保存，一年有效。

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品使用：

1. 試劑準(zhǔn)備：將100mg DAB加入到100mL磷酸緩沖液中充分溶解，即得DAB染色工作液，4℃避光保存，一周內(nèi)有效；-20℃保存，可適當(dāng)延長保質(zhì)期。注：DAB對光敏感，溶解過程需要避光，如果較 難溶解，可通過超聲、磁力攪拌等方法促溶。

2. 樣本準(zhǔn)備：采集經(jīng)脅迫（例如重金屬）的植物幼苗或根尖，自來水稍洗凈，置于濾紙上吸干多余的水分。

3. 染色：將植物幼苗或根尖浸沒在DAB染色工作染液中，常溫避光染色2~6h，至陽性部位出現(xiàn)深棕色，其余部位近無色或者呈植物本身的顏色即可。（根據(jù)植物幼嫩程度和顯色程度調(diào)整染色時間）

4. 脫色：用鑷子將植株幼苗或者葉片小心取出，浸入蒸餾水中來回漂洗3~5次，置于濾紙上吸干多余水分后，浸入95%乙醇中40℃處理3~16h，目的是脫去植株幼苗或者葉片本身的葉綠素，脫色期間可多次更換新鮮的95%乙醇。

5. 觀察：用鑷子取出植株幼苗或者葉片，浸入蒸餾水中來回漂洗3~5次，置于濾紙上吸干多余水分 后，將樣本轉(zhuǎn)入適量DAB樣本保存液中浸泡30min，隨后可取出拍照。樣本可置于該保存液中常溫保存一周。

注意事項(xiàng)：

1.      DAB染色工作液配制好以后需4℃避光保存，一周內(nèi)使用。存放時間過久，會影響顯色。

2.      因過氧化氫容易分解，且任何外在因素都可能刺激植物應(yīng)激產(chǎn)生過氧化氫，因此植物樣本需要新鮮采集，并盡快完成染色。建議做陰性及陽性空白對照組。

3.      樣本染色完成后盡快拍照保存結(jié)果。

4.      DAB可能具致癌性，請小心操作，避免直接接觸。

5.      染色和脫色步驟也可參考如下建議操作：組織放入染液中，抽真空，-0.1MPa保持負(fù)壓20~30min，再于室溫下靜置染色60min，棄染色液；加入95%乙醇，于70~80℃水浴鍋脫色，每隔10min換一次 95%乙醇，待樣品綠色全部褪去后可停止脫色。

6.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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