BsrDI

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

BsrDI來源于Bacillus stearothermophilus D70，由大小兩個(gè)亞基組成，屬于異二聚體酶。BsrDI識(shí)別特定序列GCAATG/CATTGC，切割頂鏈時(shí)在識(shí)別位點(diǎn)下游2個(gè)核苷酸處，底鏈則在識(shí)別位點(diǎn)后直接切割，產(chǎn)生特定的黏性末端，屬于Type IIS 型限制酶，可用于Golden gate組裝。

識(shí)別位點(diǎn)：

GCAATGNN
5'...G C A A T G N N ↓...3'
3'...C G T T A C↑N N ...5'

同裂酶：Bse3DI, BseMI

注：同裂酶對(duì)于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產(chǎn)品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應(yīng)條件：

1× Cut Buffer B；
37℃溫育；
參照“DNA 酶切流程”配制反應(yīng)體系。

失活條件：

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性:

對(duì)于被 EcoBI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定義:

1活性單位 (U) 是指在激活劑存在下，50 μl反應(yīng)體系中，37℃ 1 h 內(nèi)完全酶切1 μg λDNA 所需的酶量。

功能活性檢測(cè)：

37℃下，10 U BsrDI能夠在15 min內(nèi)完全消化1 μg λDNA。

超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)：

37℃下，將10 U BsrDI與1 μg λDNA共同溫育3 h，未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解。延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。

酶切-連接-再酶切檢測(cè)：

37℃下，使用10 U BsrDI消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量 T4 DNA Ligase (Fast)可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

a. DNA 底物中應(yīng)不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會(huì)影響BsrDI酶活性；

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；

③ 37℃溫育15 min~1 h；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應(yīng)，或者通過吸附柱或苯酚/氯仿純化終止反應(yīng)。

不同DNA中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

1.      反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過總體積的10%，避免酶中過多的甘油引起星號(hào)活性；

2.      限制性內(nèi)切酶存儲(chǔ)緩沖液中的添加劑(例如甘油、鹽)與底物溶液中的污染物(例如鹽、EDTA或乙醇等)相同，反應(yīng)體積越小，酶切反應(yīng)抑制效應(yīng)越強(qiáng)。

3.      BsrDI可在FastCut Buffer中使用，但星號(hào)活性明顯強(qiáng)于在Cut Buffer B中反應(yīng)。若要使用FastCut Buffer進(jìn)行反應(yīng)，不建議酶切時(shí)間超過3 h或者超過 2 U的 BsrDI/μg DNA 底物。

4.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

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