內(nèi)質(zhì)網(wǎng)藍(lán)色熒光探針（活細(xì)胞成像用）

ER-Tracker Blue-White DPX, for live-cell imaging 

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產(chǎn)品簡介：

ER-Tracker dyes是一系列細(xì)胞膜滲透性的活細(xì)胞染料，高度選擇性結(jié)合內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）。不同于傳統(tǒng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染料DiOC6(3)，該系列染料極少染色線粒體，且低濃度下染色無細(xì)胞毒性。使用提供的優(yōu)化步驟對(duì)細(xì)胞染色和甲醛處理后，可以保留部分的活細(xì)胞染色特征。

ER-Tracker Blue-White DPX是Dapoxyl (DPX)染料家族的成員之一，這類染料具有長發(fā)射波長，高吸光系數(shù)，高量子產(chǎn)量和寬廣的斯托克頻移特征。這類染料屬于環(huán)境敏感型的探針，隨著溶劑極性的增加，最大熒光遷移到更長的波長，伴隨著光量子產(chǎn)量降低。

本品為DMSO儲(chǔ)存液，濃度為1mM。用于活細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色，建議工作濃度為100nM-1μM，需根據(jù)實(shí)際情況做優(yōu)化調(diào)整。

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少六個(gè)月有效，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品特性：

1）分子式：C₂₆H₂₁F₅N₄O₄S

2）分子量：580.5283

3）外觀：黃色液體

4）Ex/Em：374/430-640nm (in methanol)

5）檢測(cè)濾片：DAPI or UV longpass

6)    化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

產(chǎn)品使用：

以下實(shí)驗(yàn)方案是根據(jù)牛肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（BPAE）優(yōu)化所得，且已驗(yàn)證適用于其他常規(guī)細(xì)胞系的染色。建議以下步驟僅作起始實(shí)驗(yàn)的參考，請(qǐng)根據(jù)具體的細(xì)胞類型和實(shí)際情況來優(yōu)化標(biāo)記條件。

1. 試劑準(zhǔn)備

ER-Tracker Blue-White DPX以1mM的DMSO儲(chǔ)存液形式提供，使用前請(qǐng)將ER-Tracker Blue-White DPX 從冰箱內(nèi)取出，確?；販刂潦覝睾?，經(jīng)短暫離心將所有溶液沉到管底。

2. 細(xì)胞染色

(1) 制備染色工作液：

將1mM ER-Tracker Blue-White DPX稀釋至工作濃度，建議工作濃度100nM-1μM。為了最小化染料過高引起的假象，建議使用能達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡淖畹蜐舛葋硗瓿扇旧?/span>

【注意】：在Hanks平衡鹽溶液（HBSS），含碳酸氫鈉和鈣、鎂離子 ，不含酚紅（CAT# NBS4100）內(nèi)進(jìn)行染色可得到最佳結(jié)果。

(2) 細(xì)胞染色：

對(duì)于貼壁細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基，用HBSS清洗細(xì)胞，加入預(yù)熱的染料工作液，37℃孵育15-30min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養(yǎng)基，并在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。如果細(xì)胞需要固定，請(qǐng)?zhí)D(zhuǎn)到步驟3。

3. 細(xì)胞固定及透化

(1) 固定和透化細(xì)胞：

用4%甲醛于37℃固定細(xì)胞10-20min。ER-Tracker Blue-White DPX染色信號(hào)在甲醛固定后僅能部分保留下來。如果還需要做其他染色，細(xì)胞需用0.2% TritonX-100 透化處理10min。

(2) 清洗和觀察細(xì)胞：

細(xì)胞固定后，用合適緩沖液清洗2次，每次5min。之后熒光顯微鏡下觀察。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      由于ER-Tracker Blue-White DPX是環(huán)境敏感型探針，會(huì)產(chǎn)生波動(dòng)較大的發(fā)射吸收峰，在430-640nm之間出現(xiàn)。長通DAPI濾光片觀察效果最理想。

3.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

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